מבוא לאמצעי תרבות מיקרוביאליים נפוצים (I)

מבוא לאמצעי תרבות מיקרוביאליים נפוצים (I)

מצע תרבות הוא מעין מטריצת תזונה מעורבת שהוכנה באופן מלאכותי מחומרים שונים לפי צורכי גידול מיקרוביאליים שונים, המשמשת לתרבות או הפרדה של מיקרואורגניזמים שונים.לכן, מטריצת התזונה צריכה להכיל חומרים מזינים (כולל מקור פחמן, מקור חנקן, אנרגיה, מלח אנאורגני, גורמי גדילה) ומים שיכולים לשמש מיקרואורגניזמים.בהתאם לסוג המיקרואורגניזמים ולמטרת הניסוי, ישנם סוגים ושיטות הכנה שונות של אמצעי תרבית.

כמה מדיות תרבות נפוצות בניסוי מוצגות כדלקמן:

מדיום אגר תזונתי:

המדיום אגר מזין משמש להתרבות והתרבות של חיידקים נפוצים, לקביעת ספירת החיידקים הכוללת, שימור מיני חיידקים והתרבות טהורה.המרכיבים העיקריים הם: תמצית בקר, תמצית שמרים, פפטון, נתרן כלורי, אבקת אגר, מים מזוקקים.פפטון ואבקת בקר מספקים מקורות חנקן, ויטמין, חומצות אמינו ופחמן, נתרן כלורי יכול לשמור על לחץ אוסמוטי מאוזן, ואגר הוא חומר הקרישה של מצע התרבות.

אגר תזונתי הוא הסוג הבסיסי ביותר של מצע תרבית, המכיל את רוב אבות המזון הנדרשים לגידול חיידקים.אגר תזונתי יכול לשמש להתרבות חיידקים שגרתית.

מדיום אגר דם:

מדיום אגר בדם הוא סוג של מדיום פפטון לתמצית בקר המכיל דם של בעלי חיים דפיברין (בדרך כלל דם ארנב או דם כבשים).לכן, בנוסף לחומרים מזינים שונים הנדרשים לטיפוח חיידקים, הוא יכול לספק גם קואנזים (כגון פקטור V), heme (פקטור X) ועוד גורמי גדילה מיוחדים.לכן, מדיום תרבית דם משמש לעתים קרובות לטיפוח, בידוד ושימור של מיקרואורגניזמים פתוגניים מסוימים הדורשים תזונה.

בנוסף, אגר דם משמש בדרך כלל לבדיקת המוליזה.במהלך תהליך הגדילה, חיידקים מסוימים יכולים לייצר המוליזין כדי לשבור ולהמיס תאי דם אדומים.כאשר הם גדלים על לוחית הדם, ניתן לראות טבעות המוליטיות שקופות או שקופות מסביב למושבה.הפתוגניות של חיידקים רבים קשורה למאפיינים המוליטיים.מכיוון שההמוליזין המיוצר על ידי חיידקים שונים שונה, גם היכולת ההמוליטית שונה, וגם תופעת ההמוליזה בצלחת הדם שונה.לכן, בדיקת המוליזה משמשת לעתים קרובות לזיהוי חיידקים.

מדיום TCBS:

TCBS הוא מדיום סוכרוז אגר של תיוסולפט ציטראט מלח מרה.לבידוד סלקטיבי של ויבריו פתוגניים.פפטון ותמצית שמרים משמשים כחומרי הזנה בסיסיים במצע התרבות כדי לספק מקור חנקן, מקור פחמן, ויטמינים וגורמי גדילה נוספים הנדרשים לגידול חיידקים;הריכוז הגבוה יותר של נתרן כלוריד יכול לענות על הצרכים של צמיחה הלופילית של ויבריו;סוכרוז כמקור פחמן מתסיס;נתרן ציטראט, סביבה אלקלית pH גבוה ונתרן תיוסולפט מעכבים את הצמיחה של חיידקי מעיים.אבקת מרה פרה ונתרן תיוסולפט מעכבים בעיקר את הצמיחה של חיידקים גרם חיוביים.בנוסף, נתרן תיוסולפט מספק גם מקור גופרית.בנוכחות ציטראט ברזל, מימן גופרתי יכול להתגלות על ידי חיידקים.אם יש חיידקים המייצרים מימן גופרתי, יווצרו משקעים שחורים על הצלחת;האינדיקטורים של מדיום TCBS הם כחול ברומוקרסול ותימול כחול, שהם אינדיקטורים לבסיס חומצה.ברומוקרסול כחול הוא מחוון חומצה-בסיס עם טווח שינוי pH של 3.8 (צהוב) עד 5.4 (כחול-ירוק).ישנם שני טווחי שינוי צבע: (1) טווח החומצה הוא pH 1.2~2.8, המשתנה מצהוב לאדום;(2) טווח האלקלי הוא pH 8.0 ~ 9.6, משתנה מצהוב לכחול.

TSA גבינת סויה פפטון אגר בינוני:

ההרכב של TSA דומה לזה של אגר תזונתי.בתקן הלאומי, הוא משמש בדרך כלל לבדיקת חיידקי שקיעה בחדרים נקיים (אזורים) של תעשיית התרופות.בחר את נקודת הבדיקה באזור לבדיקה, פתח את לוחית ה-TSA והנח אותה בנקודת הבדיקה.דגימות יילקחו כאשר הם נחשפים לאוויר במשך יותר מ-30 דקות לזמנים שונים, ולאחר מכן תרבותיים לצורך ספירת מושבות.רמות ניקיון שונות דורשות ספירת מושבות שונות.

אגר מולר הינטון:

מדיום MH הוא מדיום מיקרוביאלי המשמש לזיהוי עמידות של מיקרואורגניזמים לאנטיביוטיקה.זהו מדיום לא סלקטיבי שעליו יכולים לגדול רוב המיקרואורגניזמים.בנוסף, עמילן במרכיבים יכול לספוג רעלים המשתחררים על ידי חיידקים, ולכן זה לא ישפיע על תוצאות הפעולה האנטיביוטית.ההרכב של מדיום MH רופף יחסית, מה שמסייע לפיזור של אנטיביוטיקה, כך שהוא יכול להראות אזור עיכוב גדילה ברור.בתעשיית הבריאות של סין, מדיום MH משמש גם לבדיקת רגישות לתרופות.בעת ביצוע בדיקת רגישות לתרופה עבור כמה חיידקים מיוחדים, כגון Streptococcus pneumoniae, ניתן להוסיף 5% דם כבשים ו-NAD למדיום כדי לענות על דרישות תזונתיות שונות.

אגר SS:

אגר SS משמש בדרך כלל לבידוד סלקטיבי ולהתרבות של סלמונלה ושיג'לה.הוא מעכב חיידקים גרם חיוביים, רוב קוליפורמים ופרוטאוס, אך אינו משפיע על גדילת הסלמונלה;נתרן תיוסולפט וציטראט ברזל משמשים לזיהוי יצירת מימן גופרתי, מה שהופך את מרכז המושבה לשחור;אדום ניטרלי הוא מחוון ה-pH.המושבה המייצרת חומצה של סוכר תסיסה היא אדומה, והמושבה של סוכר שאינו מתסיס היא חסרת צבע.סלמונלה היא מושבה חסרת צבע ושקופה עם או בלי מרכז שחור, ושיג'לה היא מושבה חסרת צבע ושקופה.