מספר אנזימים בשימוש נפוץ בניסויי PCR

תגובת שרשרת פולימראז, קיצור בשםPCRבאנגלית, היא טכניקת ביולוגיה מולקולרית המשמשת להגברת שברי DNA ספציפיים.זה יכול להיחשב כשכפול DNA מיוחד מחוץ לגוף, שיכול להגדיל מאוד כמות קטנה מאוד של DNA.במהלך כולוPCRתהליך התגובה, סוג אחד של חומרים ממלא תפקיד חיוני - אנזימים.

1. Taq DNA

בניסויים בימים הראשונים שלPCR, מדענים השתמשו ב-Escherichia coli DNA polymerase I, אבל יש בעיה עם האנזים הזה: הוא צריך לחדש אנזים חדש בכל פעם שמתבצע מחזור, מה שהופך את שלבי הפעולה למעט מסובכים וקשה להגביר באופן אוטומטי לחלוטין.בעיה זו נפתרה לאחר שמדענים בודדו בטעות את פולימראז ה-Taq DNA מ-Thermus aquaticus בשנת 1988. מאז, ההגברה האוטומטית של ה-DNA הפכה למציאות.הגילוי של אנזים זה עושה גםPCRטכנולוגיה טכנולוגיה נוחה, מעשית ואוניברסלית.נכון לעכשיו, Taq DNA פולימראז הוא הפולימראז הנפוץ ביותר בערכות DNA.

2. PfuDNA

כפי שהוזכר לעיל, ל-Taq DNase יש באג גדול, ולכן מדענים שינו את הפולימראז של Taq DNA במידה מסוימת על מנת למנוע הגברה לא ספציפית עקב אי-התאמה, וכתוצאה מכך תוצאות בדיקה לא מדויקות.אבל השינוי של Taq DNA פולימראז יכול לעכב את הפעילות של DNA פולימראז בטמפרטורת החדר.PfuDNA פולימראז יכול בהחלט לפצות על החסרונות שלעיל של פולימראז DNA של Taq, כך שניתן לבצע את תגובת ה-PCR באופן רגיל, ולשפר ביעילות את שיעור ההצלחה של הגברה של גן המטרה.

3. Transcriptase הפוכה

טרנסקריפטאז הפוך התגלה בשנת 1970. אנזים זה משתמש ב-RNA כתבנית, dNTP כמצע, עוקב אחר העיקרון של זיווג בסיסים, ומסנתז גדיל DNA בודד המשלים לתבנית ה-RNA בכיוון 5'-3'.טרנסקריפטאז הפוך תלוי בעיקר בפעילות DNA פולימראז מתבניות DNA או RNA ולכן אין לו פעילות אקסונוקלאז 3'-5'.עם זאת, יש לו פעילות RNase H, המגבילה את אורך הסינתזה של תעתיק הפוך במידה מסוימת.בשל הנאמנות הנמוכה והיציבות התרמונית של תמלול הפוך פראי, מדענים שינו אותו גם.

לPCRניסויים, החומרים המתכלים העיקריים הם: צינור PCR בודד, צינור PCR 4/8 רצועות, לוחות PCR.

של לאביוחומרים מתכלים PCRיש את הדברים הבאיםיתרונות:

לוחות PCR: תאימות תרמית לאופניים רחבה;ניגודיות גבוהה, זיהוי באר קל;טוב השתקפות הקרינה; טובהעברת חום;מאושר DNase, RNase, DNA, מעכבי PCR, ונבדק ללא פירוגן.

צינורות PCR בודדים: עמיד באידוי; טובהעברת חום;בהירות אופטית מעולה; DNase, RNase, DNA, מעכבי PCR מוסמך ונבדק ללא פירוגן.

צינורות PCR של 4/8 רצועות: קירות דקים במיוחד; בהירות גבוהה; השתקפות פלואורסצנטי טובה;יכול להשתמש בתעשיית התרופות, תעשיית המזון והביולוגיה המולקולרית; חומר PP באיכות גבוהה בתולי; DNase, RNase, DNA, מעכבי PCR, ונבדק ללא פירוגן.